来源、准备和分析
SRM 998 血管紧张素I(人)这是从贝克曼仪器公司,生物产品业务(帕洛阿尔托,加利福尼亚州)获得的。
使用在5000kPa压力下操作的25cm×0.4cm十八烷基硅烷柱对该SRM的溶解的25ug样品进行液相色谱。将样品溶于81份体积为0.1摩尔l的磷酸三乙胺缓冲液(pH 3.5)和19份体积为乙腈的溶液中。
SRM 998 血管紧张素I使用两种洗脱液溶液:一种是用于溶解SRM的相同组成的溶液;另一种是75体积份缓冲液与25体积份乙腈的溶液。通过在215nm和280nm处测量吸收来监测洗脱。在浓度比为81:19时,在215nm处检测到保留时间分别为6.6分钟和12.2分钟的主峰和副峰,在280nm处仅检测到主峰。收集与每个峰对应的材料,在6molL HCI中水解并分析氨基酸组成。主峰的氨基酸含量表明它是SRM 998 血管紧张素I(人)。次要pcak(215nm处吸光度的<1%)不含可检测的肽物质。在这些高效液相色谱条件下,乙酸盐在溶剂前沿聚集,无法定量。在75∶25的洗脱液比下,在其他波长下未检测到额外的峰,表明不存在非肽、UV吸收材料。
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