NIST SRM 2366a - 巨细胞病毒DNA 旨在用于为每个样本体积中巨细胞病毒 (CMV) 可扩增基因组的拷贝数指定一个值。 当用于分配时，实际的 CMV 校准材料 NIST SRM 2366a 可以提供对国际单位制 (SI) 组织或流体（如血浆）中 CMV 病毒载量测量结果的可追溯性。

一个单元的 标准物质 NIST SRM 2366a - 巨细胞病毒DNA 由一个无菌的 0.5 mL 全氟烷氧基 (PFA) 含氟聚合物小瓶组成，其中包含大约 150 μL 提取的 DNA，溶解在 TE 缓冲液，pH 8.0 中。 TE 缓冲液由 10 mmol/L 2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇 (Tris) 和 1 mmol/L 乙二胺四乙酸 (EDTA) 四钠盐在去离子水中组成。 CMV DNA的形式是细菌人工染色体——称为CMV TowneΔ147 BAC——包含Towne菌株CMV的基因组[1,2]。

表 1. SRM 2366a 的 CMV 认证拷贝值

这些认证值是根据使用液滴数字 (ddPCR) 系统 [3] 和平均液滴体积的直接测量进行的五次聚合酶链反应 (PCR) 测定的一致结果确定的。使用高斯随机效应模型 [4] 计算认证值及其不确定性。 NIST 认证值是 NIST 对其准确性有最高置信度的值，因为所有已知或可疑的偏差来源都已被调查或考虑 [5]。

不确定性：

该材料中分析物的真实值预计在给定的概率区间内，置信水平约为 95%。出于不确定性传播的目的，请使用规定的 u(X) 或 CV，以最适合您的目的为准；这些值与 60 个自由度相关。

可追溯性：

认证值可追溯至每体积的拷贝数，表示为每微升溶液中可扩增的 CMV 实体数，通过身份确认、ddPCR 计数测量、计数到实体的 Poisson 端点转换的有效性，用于数字 PCR 端点[6]，以及在 NIST 进行的校准体积测量。计量溯源性是针对体积的 SI 单位。

认证到期：

 NIST SRM 2366a - 巨细胞病毒DNA 的认证在指定的测量不确定度范围内有效，直到 2025 年 8 月 1 日，前提是 SRM 按照本证书中的说明进行处理和存储（参见“处理、存储和使用说明”） 。如果 SRM 损坏、污染或以其他方式修改，则认证无效。

SRM 认证的维护：

NIST 将在其认证期间监控此 SRM。如果在本证书到期前发生影响认证的实质性技术变化，NIST 将通知购买者。注册（见附表或在线注册）将有助于通知。

处理、储存和使用说明

处理： NIST SRM 2366a - 巨细胞病毒DNA 是一种病毒和细菌 DNA 源材料。 由于对提取的 DNA 的感染状态没有达成共识，请将 SRM 2366a 作为生物安全处理能够传播传染病的 1 级材料 [7]。 SRM 2366a 和衍生解决方案应根据当地、州和联邦法规进行处理。

储存：NIST SRM 2366a 小瓶应储存在 2 °C 至 8 °C 之间的黑暗中。 不要冻结。

使用：在取出样品等分试样进行分析之前，小瓶应通过倒置混合并离心，而无需打开小瓶盖。 为使认证值有效，打开小瓶后应立即取出材料并立即处理。 这些材料可以适当稀释，但必须立即使用。 认证值不适用于重新封盖的小瓶中剩余的任何材料。 不要将任何 DNA 溶液直接暴露在阳光下。

制备与分析

样品制备：CMV TowneA7 BAC来自新泽西医学院(新泽西州纽瓦克H.朱)，在NIST的大肠杆菌(E.coli)细胞中进行增殖。总DNA(CMV和E.Coli)被分离、纯化并重新悬浮在TE缓冲液中。在调整浓度后，允许材料在4摄氏度的PFA容器中平衡，直到瓶装。就在装瓶之前，将瓶子放入层流罩内，置于室温下，轻轻混合。将溶液转移到带有自动移液管的PFA小瓶中，然后盖上盖子，贴上标签，并在4℃下储存。

CMV同源性的确认：Sanger和下一代测序(NGS)证实SRM 2366a中的CMV DNA与参考序列AY315197.2完全一致。