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分子印迹及液质技术检测海水中膝沟藻毒素2&3

膝沟藻毒素2&3 ( gonyautoxin 2&3，GTX2&3）是麻痹性贝类毒素（PSTs）中的一类氨基甲酸酯类毒素，具有毒性强、分布广、对生物体危害严重等特点。GTX2&3主要由亚历山大藻属分泌产生，近几年在我国临海区域经常发生亚历山大藻赤潮，分泌的贝毒经过食物链传递富集在贝类体内，对沿海养殖业造成严重的经济损失，并威胁着人类健康及生命的安全。已有研究集中在对贝类等生物样品中GTXs的检测，为了及时监测有害赤潮发生后藻毒素GTX2&3的浓度变化及其在海洋环境中的行为，本研究开发建立了可应用于海水和藻体中GTX2&3测定的样品前处理方法和液相色谱质谱联用检测方法，并应用于实际样品检测;首先对辽河入海口近岸海域海水中GTX2&3作了取样分析，其次测定了实验室培养的微小亚历山大藻和塔玛亚历山大藻的藻体及藻液中的GTX2&3含量，具体内容如下:

(1）实验中选用氰基柱作为色谱分离柱，利用将高选择性四极杆的离子过滤与Orbitrap高分辨准确质量数(HR/AM)测量技术相结合的液相色谱-四极杆轨道离子阱(HPLC-Q Exactive)高分辨质谱仪作为检测仪器。通过优化液相色谱及质谱检测条件，建立对水样中的膝沟藻毒素2&3的液质联用分析方法，检测限可以达到29.35 ng/L，精密度良好(RSD <10%,n=5)，灵敏度性能进一步得到提升。

(2）以咖啡因作为虚拟模板，采用悬浮聚合法制备了对膝沟藻毒素2&3具有特异吸附性的分子印迹微球，然后采用已制备的分子印迹微球为填料制备了分子印迹固相萃取柱。并对固相萃取的上样、淋洗等条件做了优化，建立了对环境样品中 GTX2&3完整的分子印迹固相萃取-液质联用（MISPE-LC-MS）前处理-检测方法。通过方法学验证发现其线性相关性较好（R2>0.99），回收率较高（62.80 % ~ 107.96%)，可有效降低基质效应的干扰。

(3）针对我国沿海地区能够分泌膝沟藻毒素2&3赤潮毒素的塔玛亚历山大藻和微小亚历山大藻展开研究。通过实验室培养亚历山大藻，观察藻在30d生长周期内生长密度及分泌毒素的变化，发现在藻体和滤液中都可检测到GTX2&3，说明藻毒素除了通过摄食传递到较高营养级以外，藻体也会向周围水体中释放一定量的毒素。另外对辽河入海口近岸海域海水进行了取样检测，目标物GTX2&3没有被检出。

实验建立的对水样中 膝沟藻毒素2&3的液质联用分析方法可用于海水样品及生物样品的检测，对于监测预警海洋环境及食品安全具有重要的研究价值和科学意义。