抗除草剂大豆356043 ERM-BF425d品系特异性定性和定量PCR体系的建立与评估

在过去的10年中，越来越多的转基因作物已经批准用于全球性栽培和商业化。然而，随着越来越多 的转基因食品、食品配料和添加剂进入市场和餐桌，社会上逐渐出现了争议之声，分别涉及食品安全、环 境风险和伦理等问题，这使得40多个国家和地区陆续颁布了转基因标识法规，来保护消费者的权益。大 豆是一种非常重要的转基因作物。2007 年，转基因大豆的种植面积已达到总大豆种植面积的一半以 上。抗除草剂大豆356043 是由基因枪转化生成的，含有一段孤立的、包含一个改进功能的草甘膦基因片段。这个 片段最初来自地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)和大豆(Blycine max L.)的改良原生合成酶基因。目前 只有少数出版物发表了关于抗除草剂大豆356043食品安全与毒理学的报道和一篇356043大豆的实时定量PCR 检测，尚未见对其侧翼序列和检测方法优化的报道。本研究通过反向PCR技术分离了356043大豆的侧 翼序列，并建立了基于其左右侧翼序列的品系特异性定性定量PCR检测体系。 

研究采用反向PCR分离侧翼序列，经过筛选采用限制性内切酶BglⅡ消化，产物自连后通过两组不 同引物扩增分别连接至质粒载体进行侧翼序列分析。品系特异定性实验中，经过多轮巢式PCR引物扩 增分别得到了：位于启动子和右侧翼序列上的，扩增长度为127 bp的引物对R356043-F/R，以及位于终止 子和左侧翼序列上的，扩增长度为109 bp的引物对L356043-F/R。两者检测限均达到0.05%(基因拷贝数 大约是42)。在Taqman实时定量PCR实验中，分离获得的左右侧翼序列引物都得到了线性良好的标准 曲线和较高的PCR扩增效率。 

本研究建立的基于左右侧翼序列的品系特异性定性和定量PCR体系，可用于抗除草剂大豆356043的精准检 测。通过获得准确的核酸片段信息，完善转基因植物的分子特征库，为转基因产品转化体特异性检测及 转基因生物分子检测技术标准化体系的建立提供了关键基础数据支持。另外，此方法适用于其他侧翼 序列未知的转基因作物，为新转基因作物品系特异性定性和定量PCR体系的建立与评估提供新的技术 手段。

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