IRMM-311 地衣芽孢杆菌基因组标准品样品描述每个小瓶包含一个琼脂糖插入的地衣芽孢杆菌DSM 5749未消化的基因组DNA，用于PFGE。

本CRM旨在用于PFGE公司授权的益生菌饲料添加剂地衣芽孢杆菌DSM 5749的分类鉴定。所有程序中均应使用分子生物学级（无菌、无DNA酶、RNA酶）消耗品和生物化学物质。

用SfiI限制性内切酶消化琼脂糖插入物

-将IRMM-311的琼脂糖插入物转移到含有1 mL 10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.6)的1.5 mL试管中，并在室温下孵育30 min。

-取出溶液，再加入1 mL 10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.6)，在室温下再次孵育30 min。

-在不破坏插头的情况下删除解决方案。

-在室温下插入两次30 min的0.5 mL RE缓冲液中(使用RE和制造商选择的适当缓冲液)。更新中间位置之间的限制缓冲区。

-删除限制性缓冲区。

-添加到每个插入物：30μL 10×浓缩SfiI缓冲液，30 U SfiI，添加水到最终体积为300μL。

-在50°C下孵育15-17小时。

-小心除去溶液，加入1 mL ES溶液（0.5MEDTA pH 8.0,1%（m/v）月桂酰肌氨酸钠）。

-在50下孵育过夜°C.

-取出溶液，加入250μL ESP(含蛋白酶K的ES，1 mg/mL)。

-在50时孵育2小时°C.-稀释三硼酸盐-EDTA(TBE)缓冲液(89 mmol/L三硼酸盐，2 mmol/L EDTA，pH 8.3)，例如SigmaT7527，与体积比为1：3的蒸馏水（缓冲液：水）。

-除去溶液，加入1 mL稀释的TBE缓冲液，在室温下孵育1小时。插入物可以在4°C中保存几天。

-取每个PFGE标准品D2291和D2416的1 mm琼脂糖插入片，在1 mL稀释的TBE中室温孵育1小时。

存储

IRMM-311 地衣芽孢杆菌基因组标准品样品在使用前应存储在4°C下。然而，欧盟委员会不能对在客户的场所储存材料期间发生的变化负责，特别是对打开的样品。